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    DB51 T 614-2006 馬鈴薯癌腫病檢驗鑒定技術規程

  • 上傳人: lu****yz
  • 文檔編號:31979
  • 上傳時間:2016-07-29
  • 文檔格式:PDF
  • 文檔頁數:8
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    DB51 614 2006 馬鈴薯 癌腫 檢驗 鑒定 技術規程
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    1、 案號: 6142006馬鈴薯癌腫病檢驗鑒定技術規程 006布 2006施四川省質量技術監督局發布211 6142006 I 目 次 前言 . 212 1 范圍 . 213 2 規范性引用文件 . . 213 3 術語和定義 . . 213 4 取樣方法 . . 214 5 儀器及用具 . . 214 6 試劑 . 214 7 檢驗鑒定 . . 214 8 結果判定 . . 215 9 樣品保存與處理 . . 215 6142006 212 前 言 本標準由四川省農業廳提出并歸口。 本標準起草單位:四川省農業廳植物檢疫站。 本標準主要起草人:吳志平、寧紅、郭迪金、陳素清、熊玉蘭、帥波。 614。

    2、2006 213馬鈴薯癌腫病檢驗鑒定技術規程 1 范圍 本標準規定了馬鈴薯癌腫病檢驗取樣、檢驗鑒定及樣品保存與處理的技術要求。 本標準適用于馬鈴薯癌腫病的檢驗和鑒定。 2 規范性引用文件 下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。 331 馬鈴薯種薯產地檢疫規程 5569 農業植物調運檢疫規程 3 術語和定義 下列術語和定義適用于本標準 鈴薯癌腫病 原菌屬壺菌門(鞭毛菌亞門(壺菌綱(壺。

    3、菌目(,集壺菌科 (,集壺菌屬( 內生集壺菌( 瘤 鈴薯癌腫病的典型癥狀,是由馬鈴薯癌腫病菌侵入寄主后,刺激寄主細胞組織增生而形成的大小不一的腫瘤。 養體 馬鈴薯癌腫病菌在整個侵染循環中營養生長階段所形成的菌體結構,含游動孢子、夏孢子囊堆及夏孢子囊。 殖體 馬鈴薯癌腫病菌由營養體經有性繁殖而產生的菌體結構,含接合子和休眠孢子囊。 動孢子 環境條件適合時,由馬鈴薯癌腫病菌休眠孢子囊或夏孢子囊萌發而產生。 孢子囊及夏孢子囊堆 鈴薯癌腫病菌游動孢子侵入寄主組織細胞內,使寄主細胞受刺激而膨大,菌體細胞經多次分裂,形成夏孢子囊堆,夏孢子囊堆內含物進一步發育形成多個夏孢子囊。 合子 環境條件不適合時,馬鈴。

    4、薯癌腫病菌游動孢子形成配子,并結合形成結合子。 眠孢子囊 不良環境條件下,馬鈴薯癌腫病菌接合子侵入寄主表皮細胞發育而成的有性菌體結構。 6142006 214 4 取樣方法 樣時間 產地檢疫取樣時間可在齊苗至收獲時進行;調運檢疫和土壤取樣時間可根據工作需要確定。 地檢疫取樣 株地上部典型癥狀取樣方法 植株有馬鈴薯癌腫病典型癥狀或疑似癥狀,整株取樣。 株地上部無典型癥狀取樣方法 植株無馬鈴薯癌腫病癥狀,田間對角線5點取樣,每點取5窩薯塊,共取25窩。 運檢疫取樣 存期薯塊取樣方法 在薯堆中檢查薯塊或打開包裝物檢查薯塊,發現有馬鈴薯癌腫病典型癥狀或疑似癥狀的取薯塊10個20個;未發現馬鈴薯癌腫病癥。

    5、狀,取樣方法和數量參見 5569 農業植物調運檢疫規程。 輸途中薯塊取樣方法 薯塊散裝運輸時,在薯堆中分上、中、下層檢查薯塊;薯塊包裝運輸時,打開包裝物檢查薯塊。發現有馬鈴薯癌腫病典型癥狀或疑似癥狀的取薯塊10個20個,未發現馬鈴薯癌腫病癥狀,取樣方法和數量參見 5569農業植物調運檢疫規程。 間土壤取樣方法 對角線5點取樣,每點在5 圍內挖取耕作層表土土壤約1000 g,四分法制樣后,取檢驗土樣約500 5 儀器及用具 生物顯微鏡、離心機、樣篩、燒杯、培養皿、載玻片、蓋玻片、吸管。 6 試劑 除非另有說明,本標準所用試劑均為分析純,所有試劑均用高壓滅菌的無菌容器分裝。 升汞( 取升汞 0.1。

    6、 g,用少許酒精溶解,再加蒸餾水至 100 氯化碳( 酚油 將苯酚結晶加熱熔化后取20 先后加入20 %甘油40 7 檢驗鑒定 驗鑒定原理 馬鈴薯癌腫病菌引起植株所表現的主要癥狀特征是該病初步診斷的依據,病原菌在不同侵染時期的營養體和繁殖體形態特征是準確鑒定該病的依據,通過鏡檢該病原菌的營養體和繁殖體可對馬鈴薯癌腫病進行準確判定。 型癥狀鑒定 株地上部癥狀特征鑒定 植株地上部癥狀特征描述參見331馬鈴薯種薯產地檢疫規程。 株地下部癥狀鑒定 6142006 215植株地下部典型癥狀特征: 莖基部癌瘤呈花椰菜形,癌瘤生長中不斷向周圍發展,可包圍整個莖基部,甚至露出土面。 匍匐莖癌瘤呈花椰菜形,有的。

    7、癌瘤圍繞匍匐莖生長,后期最易腐爛。 薯塊癌瘤花椰菜形,癌瘤多從芽眼為中心產生,初為乳白色,后轉為淺褐色,最后呈黑色且腐爛。癌瘤質地粗糙、疏松,感病早的薯塊多發育成畸形。 驗室檢驗 物組織檢驗 片法檢驗 取癌瘤或莖基部寄主組織、薯塊芽眼及周圍組織切片鏡檢,檢查是否有夏孢子囊堆、夏孢子囊或休眠孢子囊,還可繼續將夏孢子囊和休眠孢子囊放在有蒸餾水的玻片上,加蓋玻片靜置30 檢是否從孢子囊破裂處釋放出游動孢子。夏孢子囊及夏孢子、休眠孢子囊和游動孢子的形態特征見附錄A。 色法檢驗 染色法鏡檢游動孢子和接合子,方法參見 7331馬鈴薯種薯產地檢疫規程 。游動孢子和接合子的形態特征見附錄 A。 壤檢驗 滌法 。

    8、每1000 下表面泥土,將泥水靜置沉淀30 吸管吸取上清液倒入離心管,離心10 00 0 r/倒去上層清液,鏡檢沉淀物中是否存在休眠孢子囊。 氯化碳 已風干、研細、過篩的土樣稱取1.5 g2.0 g,倒入試管內,加四氯化碳8 分攪拌,靜置2 土壤顆粒等雜質沉降,休眠孢子懸浮在四氯化碳液中,將懸浮液倒入另一個試管中,加入乳酚油2 分攪拌、靜置,使之分層,用移液管吸取上層乳酚油孢子囊懸浮液0.1 片鏡檢。 8 結果判定 初步 診斷為馬鈴薯癌腫病,需送實驗室檢驗確診;孢子囊、休眠孢子囊、游動孢子和接合子,可判定寄主感染了馬鈴薯癌腫病菌;判定土壤中含馬鈴薯癌腫病菌。 9 樣品保存與處理 樣品需作為標本。

    9、保存的,制作成浸制標本或玻片標本,妥善保存。其余樣品用煮沸、焚燒等方式,進行滅活處理。 6142006 216 附 錄 A (規范性附錄) 馬鈴薯癌腫病菌菌體形態特征 游動孢子 游動孢子由休眠孢子囊或夏孢子囊萌發而產生,是馬鈴薯癌腫病菌的無性營養體,單核,后端有一根尾鞭,在土壤水中可移動,遇到適合的寄主,侵入寄主的芽眼或其他幼嫩部分的表皮細胞而造成為害。在寄主生長期間,可以游動孢子形態反復侵染寄主。 夏孢子囊堆 夏孢囊堆外壁橙色,內壁無色,卵形或球形,大小47 m72 m 81 m100 m,薄壁。每個夏孢子囊堆含有39個(通常以35個為多)夏孢子囊。 夏孢子囊 由夏孢子囊堆的內含物發育而成,卵形或多角形。夏孢子囊壁薄色淡,大小25 m62 m 38m87 m。夏孢子囊成熟后散發出游動孢子。 結合子 當干旱或低溫等環境條件不適合游動孢子再侵染時,游動孢子形成配子,并結合形成結合子。結合子雙核雙尾鞭,結合子侵入寄主細胞,發育為休眠孢子囊。 休眠孢子囊 休眠孢子囊是一種有性菌體結構,單個產生于癌組織表層細胞內,銹褐色;近球形,直徑25 m75 m;m m,分三層,內壁薄而無色,中壁光滑 ,金褐色,外壁厚呈褐色,外層有不規則的脊突。成熟休眠孢子囊內含有數百個游動孢子。 。

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